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Identificación de genes de sacarosa fosfato sintasa (SPS) en Colobanthus quitensis (Kunth) Bartl. (Caryophyllaceae) y análisis de expresión en diferentes tejidos y en condiciones naturales, Kathleen Estafanía Cid Sanhueza ; Profesor guía: Marely Cuba Díaz
Abstract
Colobanthus quitensis (Caryophyllaceae) se distribuye desde el sur de México hasta la Antártida marítima y es una de las dos únicas plantas vasculares que han sido capaces de colonizar el territorio Antártico. Por lo tanto, las adaptaciones fisiológicas, bioquímicas, y moleculares de esta especie son de gran interés científico, posicionando a la C. quitensis como una interesante planta modelo para el estudio de la respuesta a estrés, especialmente las relacionadas con la respuesta bajas temperaturas. Como mecanismo de crioprotección C. quitensis presenta una notable capacidad de acumular solutos compatibles, principalmente sacarosas, protegiendo a la célula del estrés por frío. En plantas la sacarosa es sintetizada por la enzima sacarosa fosfato sintasa (SPS). En dicotiledóneas la SPS se agrupan en tres diferentes familias (A, B y C), mientras que en monocotiledóneas se incluye una cuarta familia conocida como D, la expresión de estos genes tiene un patron tejido-específico, la que es regulada también por estímulos ambientales como frío y altos niveles de radiación solar. El objetivo de este trabajo fue aislar y caracterizar ADNs parciales para al menos dos isoformas de sacarosa fosfato sintasa (SPS) mediante el diseño de primers degenerados, verificando las relaciones filogenéticas entre las secuencias de las isoformas de SPS de C. quitensis con las SPS de otras especies mediante análisis bioinformático, además de establecer una relación de expresión génica tejido-específico en hojas, raíces y flor, para finalmente establecer una aproximación del patrón de expresión de las isoformas de SPS de C. quitensis, en condiciones naturales en raíces y tejidos aéreos. En consecuencia, se realizó un exhaustivo análisis bioinformático de las regiones de aminoácidos pertenecientes a los dominios conservadores que involucran el sitio activo de la enzimaDe acuerdo a esto se ha logrado el aislamiento y la identificación de transcritos CqSPSA y CqSPSB utilizando primers degenerados. Según esto fue posible la identificación de la expresión génica tejido-específico y en condiciones naturales, mediante análisis de RT-PSR. Finalmente se logró establecer una relación filogenética entre las secuencias de CqSPSA y CqSPSB con el resto de las especies involucradas en el diseño de los primers