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Clonamiento, expresión y caracterización de la isoforma 121 del factor de crecimiento del endotelio vascular humano (VEGF-A121), Geraldine del C. Aedo Vielma ; profesor guía: Oliberto Sánchez Ramos
Abstract
El factor de crecimiento endotelial vascular es una proteína homodimérica y se ha identificado como el factor más importante en el proceso de angiogénesis tumoral o angiogénesis patológica/anormal, además de otras enfermedades. Se conoce que el bloqueo del VEGF en pacientes con cáncer, inhibe el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos tumorales, y provoca la regresión de los vasos sanguíneos pre-existentes. Con esta información, el VEFG se transforma en un importante blanco terapéutico para el tratamiento de tumores sólidos. Para el desarrollo de nuevas y mejores moléculas con actividad anti-VEGF, es necesario, poder producir y caracterizar grandes cantidades de VEGF humano. Con este propósito, el presente trabajo se enfocó en el desarrollo de un vector adenoviral conteniendo el gen del VEGF121 humano (Adh-VEGF121) Mediante transducción de células de mamíferos, fue posible expresar altas concentraciones de VEGF en las células transducidas. Se estableció un proceso de purificación que permite recuperar el VEGF121 con mas de un 98% de pureza. El VEGF recombinante obtenido se expresa en forma dimérica y demostró ser biológicamente activo tanto en ensayos de proliferación, in vitro, como en ensayos de angiogénesis, in vivo